항글로불린검사,
간접 쿰스 검사 (Indirect coombs test: IAT)
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 목적
혈청중에 있는 불규칙 항체를 증명하기 위한 검사이며 Du판정, 불완전항체 Screening과 동정,
어떤종류의 혈액형의 판정,교차적합시험등에 이용된다.
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 원리
혈청을 O형 정상적혈구와 반응시킨후 적혈구를 잘 씻어 항글로불린 혈청과 반응시키면
혈청내 불규칙 항체가 존재할경우 응집을 일으킨다.
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 적용범위
1. D, S, Kell, Duffy, Kidd등 혈청 중의 항체 검출
2. 수혈을 위한 교차시험의 정밀검사를 함으로서 항체를 검출코자 할 때
2. 태아적아구증을 의심할 때 임부혈청 중에서 항체를 검출하려고 할 때
4. 면역 anti-A 및 anti-B 등 불규칙항체의 검출
5. 비예기항체(unexpected antibody)의 검출 및 동정
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 시약
항글로불린 혈청(Polyspecific, Monospecific), 생리 식염수
Screening cell : search-cyte 1,2 또는 Pooled 정성 O형 혈구
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 검사방법
1. 시험관 A,B에 피검혈청 2 drop씩 넣고 A시험관에는 시약적혈구(search-cyte 1,2의 동량 혼합액)1drop을, B시험관에는 2～5% 환자의 혈구(Autocontrol)를 넣는다.
2. 내용물을 잘 혼합하여 37℃에서 약 30분간 반응 시킨다.
3. 생리 식염수로 3～4회 Washing한후 상층을 완전히 제거한다.
4. 항글로불린 혈청 1drop을 가하고 원침후 판정한다.
5. 모든 음성반응은 현미경으로 확인한다.
음성 결과가 나오면 미리 준비한 Ig-G 감작 적혈구를 첨가한 후 다시 원심침전하여 양성임을 확인하여야 한다. 만일 IgG 감작 적혈구가 양성으로 나타나지 않으면 검사가 잘못된 것이므로 처음부터 다시 실시한다.
☞ Anti-D Titration ☜
① Test tube에 1:1 1:2 1:4 ․․․․ 로 labeling 한다.
② Undiluted - -ㅣ serum + (100μl+50μl)의 reagent red cell(2～5%)
diluted -- ㅣ
③ Incubation
④ Coomb's reagent
⑤ Centrifuge
⑥ Reading
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 판정
시험관을 Viewer 위에서 기울여 보면서 관찰
용혈이나 응집현상을 보인다면 면역항체의 존재를 나타낸 것으로 수혈 불가능
응집이 보이면 양성, 비응집이면 음성
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 정상치
정상치 : 음성
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 주의점
1. 간접쿰스에 의한 교차시험에서 주시험이 양성일경우 부적합하므로 수혈하지않는다.
2. 신선한 혈청을 이용한다.(오래된 검체는 위음성의로 나올 가능성이 있다.)
3. 즉시 검사하지 못할때에는 혈청을 4℃ 냉장고에 보관한다.
4. 여기서 사용되는 적혈구는 교차시험의 경우에는 헌혈 혈액, 항체선별검사의 경우에는 선별용 혈 구,
항체동정검사의 경우에는 동저용 혈구, 자가대조시험의 경우에는 환자의 혈구가 된다.
세척, 항글로불린혈청의 첨가, 원심침전 및 판독 판정은 중단없이 바로바로 연결되어 시행되어야
한다. (지연이 되면 항체가 용출되어 항글로불린혈청을 중화시키거나 반응성이 약해짐)
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 위양성 반응 원인
1. 불완전 한냉항체(incomplete cold agglutinin)가 자연적으로 환자 또는 공혈자의 혈청에 존재할 때
2. 검사할 혈구가 세균오염 되었거나 패혈증 환자의 경우 항글로불린 검사에서 위양성
3. 지나친 원심침전
4. 적절하지 못하게 만든 항글로불린 혈청이 소량의 비특이종항체를 갖고 있을 때
5. 망상적혈구증다증(reticulocytosis) 때
간접 쿰스 검사(Indirect coombs test) 위음성 반응 원인
1. 불충분한 혈구 세척 시
2. 오래된 혈구부유액 사용 시
3. 항글로불린의 역가가 저하됐을 때
4. 부정확한 항온방치 시간일 때
5. 혈구 세척과정 중이거나 또는 검사과정 중에 일이 지연되거나 중단하여 방치하면 적혈구로부터 항체가 용출되기 때문
항글로불린 검사에 영향을 미치는 요인
1. 감작과정 (sensitization phase in vitro)
① 온도
② 매질
③ 항혈청과 혈구와의 비율 = 2 : 1
④ 반응시간
2. 혈구세척과정 (cell washing phase)
① 혈구세척은 빨라야 한다
② 세척 시 식염수를 완전히 따라버려야 한다
③ 혼합 시에는 반드시 parafilm 마개를 해야한다
④ 4부 tube에는 식염수를 3/4정도 채운다
⑤ 세척 후 곧바로 항글로불린 혈청을 가하는 것